山羊抗小鼠IgG-Fc片段HRP偶联二抗，即开即用，良好匹配HRP检测体系

一、产品概述由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本产品为山羊抗小鼠IgG-Fc片段的多克隆抗体货号A90-131P经固相吸附确保类特异性并通过亲和层析纯化后与辣根过氧化物酶HRP共价偶联酶与抗体的摩尔比为4:1。该抗体特异性识别小鼠IgG分子的Fc区域重链恒定区而不与Fab片段或轻链发生交叉反应同时与IgA、IgM的交叉反应可忽略不计。本品适用于酶联免疫吸附测定ELISA、免疫细胞化学ICC、免疫组织化学IHC及免疫印迹WB等多种检测技术是检测或捕获小鼠来源一抗的理想通用二抗试剂。二、详细规格参数 | 规格靶标 | 小鼠IgG-Fc片段反应种属 | 小鼠应用 | ELISA, ICC, IHC, WB宿主 | 山羊克隆性 | 多克隆形式 | 全IgG抗体类型 | IgG偶联物 | HRP辣根过氧化物酶纯度 | 抗原亲和纯化抗原种属 | 小鼠浓度 | 1 mg/ml储存温度 | 2 - 8 °C有效期 | 自收货之日起1年缓冲液 | 磷酸盐缓冲液PBS含0.2% BSA及0.05% Pro-Clean 400酶/抗体比例偶联前免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4最终HRP与IgG摩尔比为4:1确保高标记效率同时保留抗体结合活性。三、产品制备与质量控制本抗体的制备采用多步工艺确保高特异性与低背景1. 免疫与血清采集使用小鼠IgG-Fc片段作为免疫原免疫山羊采集抗血清。2. 固相吸附抗血清通过固相吸附去除与IgA、IgM及其他血清蛋白交叉反应的组分确保类特异性。3. 亲和纯化将抗原小鼠IgG-Fc偶联至琼脂糖凝胶通过亲和层析分离特异性抗体。4. HRP偶联纯化后的抗体与辣根过氧化物酶按优化比例4:1共价偶联经纯化去除游离酶。5. 质控验证免疫电泳确认抗体仅与小鼠IgG-Fc形成沉淀弧与IgA、IgM无反应。ELISA直接法检测显示对小鼠IgG-Fc的滴度≥1:100,000对小鼠IgA、IgM的交叉反应1%。种属交叉反应测试可能与其他物种如大鼠、人的IgG有轻度交叉建议在使用前进行预实验验证。四、推荐应用与实验条件以下推荐稀释度为起始参考值不同实验体系样本类型、一抗浓度、检测灵敏度要求可能需要进一步优化。应用 | 推荐稀释度 | 备注ELISA | 1:10,000 – 1:100,000 | 用于直接或间接ELISA中检测结合的小鼠一抗。建议进行棋盘滴定确定最佳工作浓度。底物推荐TMB或ABTS。Immunocytochemistry (ICC) | 1:200 – 1:5,000 | 用于细胞爬片或培养细胞的免疫化学染色。固定透化后孵育小鼠一抗再以本二抗孵育。DAB或荧光底物均可使用。Immunohistochemistry (IHC) | 1:200 – 1:5,000 | 适用于福尔马林固定石蜡包埋FFPE及冰冻组织切片。需注意内源性过氧化物酶的封闭如3% H2O2。Western Blot (WB) | 1:5,000 – 1:50,000 | 用于检测膜上由小鼠一抗识别的蛋白条带。推荐使用5%脱脂牛奶-TBST封闭及稀释抗体室温孵育1小时或4°C过夜。ECL化学发光检测。通用操作步骤1. 在完成一抗小鼠来源孵育并洗涤后加入适当稀释的本HRP二抗。2. 室温孵育30–60分钟。3. 充分洗涤WB建议3–5次每次5分钟IHC/ICC建议3次每次5分钟ELISA建议3–5次每次3分钟。4. 加入相应底物显色或化学发光检测。五、储存与稳定性储存条件2 - 8°C严禁冷冻。冷冻会导致酶失活及抗体聚集。有效期自收货之日起1年在未稀释、2-8°C避光保存。运输条件冰袋冷藏运输收货后立即存放于2-8°C。缓冲液成分含0.2% BSA作为稳定蛋白0.05% Pro-Clean 400作为防腐剂替代叠氮钠因为叠氮钠会抑制HRP活性。注意本产品不含叠氮钠可直接用于HRP检测体系。避免污染取用时应使用无菌吸头避免反复开盖。六、注意事项1. 仅限科研使用不得用于临床诊断或治疗。2. 内源性过氧化物酶封闭在进行IHC/ICC或ELISA时若样本含有内源性过氧化物酶如血液、组织中的红细胞需用0.3–3% H₂O₂处理10–20分钟否则会产生高背景。3. 种属交叉反应本抗体可能与其他物种的IgG发生交叉反应如大鼠、人。在涉及多种属样本的实验中建议设置适当的阴性对照或预吸附。4. 稀释液选择建议使用含1% BSA或5%脱脂牛奶的PBS/TBST稀释抗体避免使用叠氮钠作为防腐剂会抑制HRP。5. 工作液稳定性稀释后的抗体工作液应在当日使用完毕不建议反复使用或长期保存。6. 底物选择HRP的常用底物包括ELISATMB450 nm检测、ABTS405 nm、OPD492 nmWBECL化学发光底物IHC/ICCDAB棕色沉淀、AEC红色沉淀7. 对照设置每次实验应设置仅加二抗不加一抗的阴性对照以评估非特异性结合。